产品名称：Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）琥珀酰亚胺酯

英文名称：Super Fluor 750, SE

产品价格：

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产品简介：

Super Fluor活化酯（与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）：

Super Flour 系列荧光探针，具有更强的荧光强度，更广的pH应用范围（pH 4～10）, 更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。

三．常见问题：

1．标记效率低——计算结果显示每摩尔145,000 MW 的蛋白标记的荧光团少于4mol

有以下原因：

1）缓冲液中含有痕量伯铵成分，与染料反应降低了标记效率。如果蛋白已经溶于含氨基的缓冲液（如Tris或氨基乙酸），标记前用PBS透析。

2）蛋白含量较低 (≤1 mg/mL)会影响标记效率。

3）标记步骤中加入碳酸氢钠的作用是将反应混合物的pH升高至～8，因为在弱碱性环境中标记反应的效率*。如果蛋白溶液的缓冲范围在低pH，加入重碳酸盐也无法将pH调节至最适水平。要么加大重碳酸盐的量，要么将缓冲液换成PBS，或用0.1 M碳酸氢钠透析等。

4）研究显示pH升至9.0～9.4，标记效率和标记速度（只需10min）明显改善。

5）不同抗体与荧光团的反应速率不同，染料标记后保留的生物活性程度也不同，因此标准步骤也不是总有*的标记结果。为增加标记率，可以对同一样品进行再标记，或减少蛋白的量加大染料的量重新标记。有研究者在室温孵育1小时后再4℃孵育过夜，情况有所改善。

2．过标记——计算结果显示每摩尔145,000 MW 的蛋白标记的荧光团大于10mol。虽然过标

记的蛋白也可以使用，但可能会引起蛋白的聚集、降低抗体结合抗原的特异性，这些都会造成非特异性结合。过标记还会引起荧光淬灭。可以增加蛋白或减少反应时间。

3．未结合染料难以去除——尽管大部分时候用分离柱可以较好的纯化蛋白偶联物，但仍可能会有痕量的游离染料留在偶联物溶液中，会使标记计算的值偏高。可用分离柱再次分离或透析去除。

4．蛋白或蛋白偶联物无法洗脱——不要再加缓冲液，只需再次离心一次或几次。

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